OECD 431: in vitro Human Skin Corrosion: Reconstructed Human Epidermis Test Method, in vitro Test
OECD 431 / In Vitro Hautkorrosion: Reconstructed Human Epidermis (RhE) Testmethode
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OECD 431:
Hautkorrosion im regulatorischen Gefahrenklassifizierungs- und Kennzeichnungskontext wird definiert als die Erzeugung irreversibler Schäden an der Haut, die im Allgemeinen als Nekrose durch die Epidermis und in die Dermis sichtbar wird, nach einer definierten chemischen Exposition. Der In Vitro Hautkorrosionstest ist ein in vitro, tierversuchsfreier Test, der darauf abzielt, jene Chemikalien und Mischungen zu identifizieren, die Hautkorrosion hervorrufen können (UN GHS Kategorie 11), und in einigen Fällen, um korrosive Stoffe teilweise in UN GHS Unterkategorien 1A oder 1B und 1C zu unterteilen (d.h. die aktuellen Testmethoden unterscheiden nicht effektiv zwischen UN GHS Unterkategorien 1B und 1C).
Diese Testmethode ist nützlich für die regulatorische Klassifizierung und Kennzeichnung von Chemikalien und Mischungen, und je nach regulatorischer Zuständigkeit und Rahmen können die Testergebnisse als eigenständige Ergebnisse oder zur Unterstützung eines Gewicht-von-Beweisen-Ansatzes verwendet werden. Da Hautkorrosion in vivo typischerweise aus schnellem, chemisch induziertem Zellschaden resultiert, bietet diese Testmethode eine mechanistisch relevante Messung der Zellviabilität in rekonstruierten menschlichen Epidermis (RhE) Geweben nach einer einmaligen topischen chemischen Behandlung im Vergleich zu negativ kontrollierten Geweben.
INVITRO-CONNECT verfügt über umfassende Expertise mit einer Vielzahl von rekonstruierten hautbasierten Protokollen. Die Mitarbeiter von INVITRO-CONNECT nahmen an der ursprünglichen Validierungsstudie teil, die zur Annahme der OECD-Testleitlinie 431: In Vitro Hautkorrosion: Reconstructed Human Epidermis Testmethode (TG 431) führte.
HINWEIS: Da diese Testmethode zwischen keinen nicht-korrosiven Kategorien unterscheidet, sollte eine nicht-korrosive Vorhersage durch diese Testmethode mit einem Test auf potenzielle Hautreizung gefolgt werden, unter Verwendung einer der validierten Hautreizungstest (SIT) Methoden, einschließlich des In Vitro Hautreizungstests unter Verwendung eines Reconstructed Human Epidermis (RhE) Modells.
Eine Vielzahl anderer Protokolle steht zur Verfügung, um potenzielle Hautreizungen über ein Spektrum von Reizungs- und Korrosionsreaktionen zu bewerten, um die Produktentwicklung, Produktverantwortung, Auswahl von Kandidatenformulierungen und andere nicht-regulatorische Anwendungen zu unterstützen, und kann eine Rangordnung des Hautreizpotentials bereitstellen. Eine Vielzahl von Protokollen ermöglicht die Bewertung milder Formulierungen wie:
- Time-to-Toxicity ET50 Screening-Protokoll
- Cytokine-Expressionsassay für milde Produkte
- In Vitro Hautreizung / Korrosionsscreen für moderate bis korrosive Produkte und Mischungen
Wenn eine vollständige korrosive Unterkategorisierung unerlässlich ist und um zwischen UN GHS Unterkategorien 1B und 1C zu unterscheiden, kann der Corrositex Membranbarrieretimer verwendet werden.
3-D rekonstruierten menschlichen Epidermis (RhE) Modelle wie EpiDerm™ (MatTek Corp.), epiCS® (CellSystems), LabCyte EPI-MODEL (Japan Tissue Engineering Co., Ltd.), und EpiSkin™ und SkinEthic™ RHE (EpiSkin SA) sind organotypische in vitro Modelle der menschlichen Epidermis, die in einer Vielzahl von Assays verwendet werden können, um die dermale Reizung, Korrosivität, Zytotoxizität, Phototoxizität und/oder das entzündungshemmende Potenzial von Testmaterialien zu bewerten. Die Viabilität der Gewebe wird unter Verwendung des Vitalfarbstoffs MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) bestimmt. Die Reduktion von MTT in mit Testmaterial behandelten Geweben wird als Prozentsatz im Vergleich zu negativ kontrollierten Kulturen ausgedrückt.
Die EpiDerm™, epiCS®, LabCyte EPI-MODEL, EpiSkin™ und SkinEthic™ RHE Gewebemodelle bestehen aus menschlichen Epithelzellen, die auf speziell gestalteten Zellkultur-Einsätzen kultiviert werden. Die Zellen differenzieren sich zu einer vollständig differenzierten Epidermis, die mit einem funktionalen Stratum corneum ausgestattet ist (siehe Bild unten). Ein Vorteil der Verwendung von 3-D RhE Geweben ist, dass Testmaterialien topisch, in voller Formulierungskonzentration, ohne Verdünnung angewendet werden, sodass die meisten Formen von Testmaterialien auf die Kulturen in derselben Weise aufgebracht werden können, wie es in vivo der Fall ist.
1 Vereinte Nationen (UN) Global Harmonisiertes System (GHS) zur Klassifizierung und Kennzeichnung von Chemikalien