OECD 439 - Menschliche Hautreizung / Epiderm: OECD 439, in vitro Test - INVITRO-CONNECT GmbH
Testleitlinie Nr. 439
OECD 439 / In-vitro-Hautirritation Reconstructed Human Epidermis Testmethode
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OECD 439 / Hautirritationstest (SIT) in einem Reconstructed Human Epidermis (RhE) Modell
Hautirritation im Kontext der regulatorischen Gefahrenklassifizierung und -kennzeichnung wird definiert als die Erzeugung reversibler Schäden an der Haut nach einer definierten chemischen Exposition. Der Hautirritationstest (SIT) ist ein in vitro, tierversuchsfreier Test, der darauf abzielt, diejenigen Chemikalien und Mischungen zu identifizieren, die in der Lage sind, moderate Hautirritationen (UN GHS Kategorie 2 Hautirritantien1) zu induzieren, und zwischen UN GHS Kategorie 2 Hautirritantien und UN GHS 3 Milden Hautirritantien sowie solchen, die nicht für das Hautirritationspotenzial klassifiziert werden müssen, zu unterscheiden.
Diese Testmethode ist nützlich für die regulatorische Klassifizierung und Kennzeichnung von Chemikalien und Mischungen, und je nach regulatorischer Zuständigkeit und Rahmenbedingungen können die Testergebnisse als eigenständige Ergebnisse oder zur Unterstützung eines Gewicht-von-Beweisen-Ansatzes verwendet werden. Da Hautirritation in vivo typischerweise aus chemisch induzierten Zellschäden und der anschließenden entzündlichen Kaskade resultiert, bietet diese Testmethode eine mechanistisch relevante Messung der Zellviabilität in rekonstruierten menschlichen Epidermis (RhE) Geweben nach einer einmaligen topischen chemischen Behandlung im Vergleich zu negativ kontrollierten Geweben. Chemikalien, die die relative Viabilität auf ≤ 50 % reduzieren, würden als irritierend (und potenziell ätzend) klassifiziert, während solche, die eine relative Viabilität > 50 % ergeben, gemäß UN GHS Kategorie 2 nicht als Hautirritant eingestuft werden.
INVITRO-CONNECT GmbH verfügt über umfangreiche Expertise mit einer Vielzahl von rekonstruierten hautbasierten Protokollen und hat an den Vorvalidierungs- und Validierungsstudien teilgenommen, die zur Annahme der OECD Testleitlinie 439: In Vitro Hautirritation: Reconstructed Human Epidermis Testmethode (TG 439) führten.
HINWEIS: Da diese Testmethode die UN GHS Kategorien 1 und 2 nicht unterscheidet, sollte eine Irritationsvorhersage durch diese Testmethode mit einem Test auf potenzielle Hautkorrosion, unter Verwendung einer der validierten Korrosivitätstestmethoden, nachverfolgt werden. 1) Corrositex Membranbarrieretest und 2) In Vitro Hautkorrosionstest unter Verwendung eines Reconstructed Human Epidermis (RhE) Modells
Eine Vielzahl anderer Protokolle steht zur Verfügung, um potenzielle Hautirritationen zu bewerten, um die Produktentwicklung, Produktverantwortung, Auswahl von Kandidatenformulierungen und andere nicht-regulatorische Anwendungen zu unterstützen, und kann eine Rangordnung des Hautirritationspotenzials bereitstellen. Eine Vielzahl von Protokollen ermöglicht die Bewertung milder Formulierungen: 1) Time-to-Toxicity ET50 Screening-Protokoll und 2) Cytokine-Expressionsassay für milde Produkte sowie für moderate bis ätzende Produkte und Mischungen: 3) In Vitro Hautirritation / Korrosionsscreen
3-D rekonstruierten menschlichen Epidermis (RhE) Modelle wie EpiDerm™ (MatTek Corp.), epiCS® (CellSystems), LabCyte EPI-MODEL (Japan Tissue Engineering Co., Ltd.), und EpiSkin™ und SkinEthic™ RHE (EpiSkin SA) sind organotypische in vitro Modelle der menschlichen Epidermis, die in einer Vielzahl von Assays verwendet werden können, um die dermale Irritation, Korrosivität, Zytotoxizität, Phototoxizität und/oder das entzündungshemmende Potenzial von Testmaterialien zu bewerten. Die Viabilität der Gewebe wird unter Verwendung des Vitalfarbstoffs MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) bestimmt. Die Reduktion von MTT in mit Testmaterial behandelten Geweben wird als Prozentsatz relativ zu negativ kontrollierten Kulturen ausgedrückt.
Die EpiDerm™, epiCS®, LabCyte EPI-MODEL, EpiSkin™ und SkinEthic™ RHE Gewebemodelle bestehen aus menschlichen Epithelzellen, die auf speziell gestalteten Zellkultur-Einsätzen kultiviert werden. Die Zellen differenzieren sich zu einer vollständig differenzierten Epidermis, die mit einer funktionalen Hornschicht ausgestattet ist (siehe Bild unten). Ein Vorteil der Verwendung von 3-D RhE-Geweben besteht darin, dass Testmaterialien topisch, in voller Formulierungsstärke, ohne Verdünnung angewendet werden, sodass die meisten Formen von Testmaterialien auf die Kulturen in derselben Weise angewendet werden können, wie es in vivo der Fall ist.
1 Vereinte Nationen (UN) Global Harmonisiertes System (GHS) zur Klassifizierung und Kennzeichnung von Chemikalien